Высокопродуктивная наработка гетерологичных белков – важная задача, стоящая перед промышленной биотехнологией. И ее решение может быть достигнуто использованием автоиндуцируемых (автоиндуцибельных) систем экспрессии. Сообщалось о разработке экспрессионной плазмиды на основе Bacillus subtilis с SigB-зависимым промотором ohrB. Экспрессионную систему проводили через процедуру культивирования клеток при высокой плотности (high cell density cultivation) для получения ксиланазы как стабильного модельного белка. Рекомбинантный штамм культивировали в искусственной среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода. С целью предотвратить ингибирование субстрата использовали стратегию экспоненциальной подачи субстрата в культуру с подпиткой (exponential fed-batch feeding strategy). Резкое увеличение ксиланазной активности (приблизительно в 6 раз) в конце ферментации происходило в результате активации фактора сигма В (SigB), что подтверждает способность экспрессионной системы к автоиндукции...

Высокопродуктивная наработка гетерологичных белков – важная задача, стоящая перед промышленной биотехнологией. И ее решение может быть достигнуто использованием автоиндуцируемых (автоиндуцибельных) систем экспрессии. Сообщалось о разработке экспрессионной плазмиды на основе Bacillus subtilis с SigB-зависимым промотором ohrB. Экспрессионную систему проводили через процедуру культивирования клеток при высокой плотности (high cell density cultivation) для получения ксиланазы как стабильного модельного белка. Рекомбинантный штамм культивировали в искусственной среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода. С целью предотвратить ингибирование субстрата использовали стратегию экспоненциальной подачи субстрата в культуру с подпиткой (exponential fed-batch feeding strategy). Резкое увеличение ксиланазной активности (приблизительно в 6 раз) в конце ферментации происходило в результате активации фактора сигма В (SigB), что подтверждает способность экспрессионной системы к автоиндукции. В случае контрольного штамма специфической индукции ксиланазной активности не происходило. Увеличение ксиланазной активности для рекомбинантного штамма было в 5 раз выше, чем для контрольного штамма. Кроме того, сконструированная система обладает резистентностью к катаболитной репрессии. Эта SigB-зависимая экспрессионная система может рассматриваться как инструмент биотехнологии и альтернатива снижения стоимости общепринятых индукторов, например изопропил- -галактопиранозида.